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Concept
Polylinker
Résumé
vignette|428x428px|Un pUC19 vecteur de clonage montrant le site de clonage multiple de séquence avec l'enzyme de restriction des sites.
Un site de clonage multiple (MCS ou SCM), également appelé un polylinker, est un court segment de l'ADN , qui contient de nombreux (jusqu'à ~20) sites de restriction - une caractéristique standard de l'ingénierie des plasmides. Les sites de restriction au sein d'un SCM sont généralement uniques, c'est-à-dire qu'ils ne sont présents qu'une fois à l'intérieur d'un plasmide. Le but d'un MCS dans un plasmide est de permettre à un morceau d'ADN de s’y insérer . Un MCS est trouvé dans une variété de vecteurs, y compris les vecteurs de clonage pour augmenter le nombre de copies d'ADN cible, et dans des vecteurs d'expression pour créer un produit de la protéine. Dans des vecteurs d'expression, le MCS est situé en aval du promoteur.
Dans certains cas, un vecteur peut ne pas contenir un MCS, dans ce cas, un MCS peut être ajouté à un vecteur, cette même méthode peut être utilisée pour ajouter de nouveaux sites de restriction pour un site de clonage multiple. La première étape est de concevoir des oligonucléotides complémentaires de séquences qui contiennent l'enzyme de restriction sites ainsi que d'autres bases sur la fin qui sont complémentaires du vecteur après digestion. Ensuite, les séquences d'oligonucléotides peuvent se réapparier et être ligaturés dans le vecteur digéré et purifié. Le vecteur digéré est coupé par une enzyme de restriction qui complète l'oligonucléotide. Après la ligature, le vecteur peut être transformé dans des bactéries. Le séquençage permet de vérifier l'insertion.
centré|vignette|582x582px|Un diagramme montrant le processus de l'insertion d'un site de clonage multiple dans un vecteur plasmidique.
Les sites de clonage multiples sont une fonctionnalité qui permet l'insertion d'ADN étranger sans perturber le reste du plasmide, ce qui le rend extrêmement utile dans la biotechnologie, bio-ingénierie, et de la génétique moléculaire.
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