Coloration négative

En microscopie, la coloration négative est une méthode établie, souvent utilisée en microscopie diagnostique, pour contraster un échantillon mince avec un fluide optiquement opaque. Dans cette technique, le fond est coloré, laissant le spécimen réel intact et donc visible. Cela contraste avec la coloration positive, dans laquelle l'échantillon réel est coloré. Pour la microscopie à fond clair, la coloration négative est généralement effectuée à l'aide d'un fluide d'encre noire tel que la nigrosine et l'encre de Chine . L'échantillon, tel qu'une culture bactérienne humide étalée sur une lame de verre, est mélangé avec le colorant négatif et laissé sécher. Lorsqu'elles sont observées au microscope, les cellules bactériennes, et peut-être leurs spores, apparaissent claires sur le fond sombre environnant. Une méthode alternative a été développée en utilisant un stylo de marquage étanche ordinaire pour délivrer la coloration négative. Dans le cas de la microscopie électronique en transmission, l'opacité aux électrons est liée au numéro atomique, c'est-à-dire au nombre de protons. Les colorants utilisés sont le le molybdate d'ammonium, l'acétate d' uranyle, le formate d'uranyle, l'acide phosphotungstique, le tétroxyde d'osmium, le ferricyanure d'osmium et l'auroglucothionate . Ceux-ci ont été choisis car ils diffusent fortement les électrons et s'adsorbent également bien à la matière biologique. Les structures qui peuvent être colorées négativement sont beaucoup plus petites que celles étudiées au microscope optique. Ici, la méthode est utilisée pour visualiser des virus, des bactéries, des flagelles bactériens, des structures membranaires biologiques et des protéines ou des agrégats de protéines, qui ont tous un faible pouvoir de diffusion des électrons. Certains colorants, telles que le tétroxyde d'osmium et le ferricyanure d'osmium, sont très actifs chimiquement. En tant qu'oxydants puissants, ils réticulent les lipides principalement en réagissant avec des liaisons carbone-carbone insaturées, et fixent ainsi les membranes biologiques en place dans les échantillons de tissus et les colorent simultanément.