Isolement (microbiologie)

L'isolement est une technique qui permet de séparer les bactéries d'un échantillon en utilisant des milieux de culture solides, sélectifs ou non, pour les différencier. L'isolement permet d'obtenir des colonies différentes, espacées les unes des autres. On cherche à isoler les différentes cellules de l'échantillon, chaque cellule isolée étant alors potentiellement susceptible de conduire à une colonie (mais parfois on obtiendra des colonies mixtes difficilement résolubles ...). L'isolement permet d'observer les colonies. Pour ce faire, on utilise une anse de platine ou une pipette boulée. L'instrument peut être stérilisé entre chaque utilisation. La méthode des quadrants consiste à diviser une boîte de Petri en deux (50 % et 50 %), puis de diviser de nouveau par deux une moitié afin d'obtenir 3 quadrants de 50 %, 25 % et 25 %. Sur le plus grand quadrant une petite quantité d'inoculum est posée puis étalée. La boîte est ensuite tournée d'un quart afin d'étaler les bactéries sur un quadrant plus petit, puis de nouveau tournée d'un quart afin d'ensemencer le dernier petit quadrant. Les stries doivent être serrées et la pipette Pasteur ou l'anse de platine peut être flambée entre chaque cadran pour de meilleurs résultats. Il ne faut pas passer deux fois au même endroit et de ne pas revenir "en arrière" lorsque l'on fait pivoter la boîte, sinon l'anse (ou la pipette) risque de se surcharger et l'isolement sera moins réussi. C'est sur le dernier quadrant que se retrouvent les colonies isolées. Une méthode toute simple consiste à déposer l'inoculum à la périphérie de la boîte. On étale ensuite ce prélèvement vers le bas en stries serrées puis à nouveaux d'autres stries partant des bords des précédentes bords à bords. Cette méthode est notamment utilisée dans le cas des prélèvements d'urines et permet une évaluation de la concentration microbienne. Dans cette méthode, on étale les microorganismes à la périphérie de la boîte de Petri, puis on les étale vers le centre de la boîte.