Peroxydase de raifort
La peroxydase de raifort (HRP, de l'anglais horseradish peroxidase) est une oxydoréductase qui catalyse la réaction : 2 donneurs phénoliques + 2 radicaux phénoxyle du donneur + 2 . Cette enzyme est très utilisée en biochimie, notamment lors de protocoles de détection de molécules lors d'immunohistochimie ou d'immuno-blot (western blot), ainsi que pour son action catalytique lors des réactions d’oxydoréduction. Il s'agit d'une hémoprotéine dont on connaît de nombreuses isoformes, variant notamment par la nature des oses qui leur sont liés, la plus étudiée étant l'isoenzyme de type C. L'enzyme est observée avec des substrats dont l'altération en présence de peroxyde d'hydrogène peut être suivie par spectrophotométrie. Il existe de nombreux substrats conçus pour fonctionner avec la peroxydase de raifort, qui catalyse la conversion de substrats chromogènes en composés colorés, ou qui produit de la lumière à partir de substrats chimioluminescents ; on peut noter l'ABTS, l'OPD, le DAB, l' ou encore le TMB pour les réactions colorées ; l' et la tyramine pour la spectroscopie de fluorescence ; le luminol pour la production de lumière. redresse=3|centre|vignette| Structure de substrats utilisés avec la peroxydase de raifort. La peroxydase de raifort est une glycoprotéine d'environ — dont pour l'holoenzyme, pour les cofacteurs (hème et cations de calcium Ca) et pour la glycosylation — dont six résidus de lysine peuvent être conjugués pour marquer la molécule. Cela donne un dérivé coloré, fluorescent ou luminescent de la molécule marquée lorsqu'elle est incubée avec le substrat qui convient, ce qui permet de la détecter et d'en mesurer la quantité. La protéine HRP est souvent utilisée sous forme conjuguée avec une molécule cible qu'elle permet de marquer pour détection et quantification. Par exemple, un anticorps conjugué avec la peroxydase de raifort permet de détecter une faible quantité d'une protéine particulière dans le cadre d'un western blot.
