Cette séance de cours couvre les limites de la microscopie à fluorescence conventionnelle, les principes de la microscopie confocale et les facteurs limitant la profondeur d'imagerie en microscopie confocale. Il traite de l'absorption et de la diffusion de la lumière dans les tissus, des défis de l'imagerie d'échantillons biologiques épais et de l'utilisation de colorants dans le proche infrarouge pour l'imagerie optique. En outre, il explore la microscopie à deux photons, la théorie de l'absorption à deux photons et les spectres d'excitation à deux photons relatifs pour diverses sondes fluorescentes et protéines.