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Concept
Spectroscopie de corrélation de fluorescence
Résumé
vignette|Exemple de SCF
La Spectroscopie de Corrélation de Fluorescence (SCF ou FCS pour l'anglais Fluorescence Correlation Spectroscopy) repose sur l'analyse des corrélations des fluctuations de l'intensité de la fluorescence. L'analyse fournit les paramètres physiques gouvernant ces fluctuations. L'une des applications intéressantes est l'analyse des fluctuations de la concentration de particules fluorescentes (souvent des molécules marquées) en solution. Dans cette application, on enregistre la fluorescence émise par un très faible volume ne contenant qu'un petit nombre de particules. L'intensité de la fluorescence fluctue alors à cause du mouvement Brownien des particules, le nombre moyen de particules dans le sous-système défini par le système optique varie aléatoirement autour de sa valeur moyenne. L'analyse permet d'obtenir le nombre moyen de particules mais aussi le temps de diffusion moyen. On peut ainsi déterminer la concentration et la taille des particules, des paramètres importants pour la recherche en biochimie, biophysique ou chimie.
La SCF est un outil d'analyse très sensible car il permet d'observer un faible nombre de molécules (concentration allant du nanomolaire au picomolaire) dans un petit volume (~). Contrairement à d'autres méthodes (la Chromatographie en phase liquide à haute performance par exemple), la SCF n'introduit pas de processus de séparation physique, au contraire elle atteint sa résolution spatiale grâce à son dispositif optique. De plus, la SCF permet l'observation de molécules marquées par des fluorophores dans les voies métaboliques de cellules vivantes. Ceci a ouvert la voie à un nouveau champ de la biochimie in situ ou in vivo qui détermine les voies métaboliques des cellules et des organes intacts.
Généralement, la SCF est employée autour d'un microscope optique, en particulier un microscope confocal. Pour ces techniques, la lumière est concentrée sur un échantillon et les fluctuations d'intensité de fluorescence mesurées (dues à la diffusion, à des réactions chimiques ou physiques, à l’agrégation, etc.
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