La culture microbienne ou culture microbiologique est une technique de laboratoire de développement contrôlé de micro-organismes, croissance in vitro, en principe d'une seule souche bactérienne. Ces cultures facilitent donc l'étude des souches bactériennes. Les techniques de culture sont nombreuses ; elles varient en fonction : de la nature du prélèvement: surfaces, pus, sécrétions, selles, organes, broyages ... des buts de l'étude: identification, dénombrement, antibiogramme... de la précision attendue: dans le cas de bactéries pathogènes par exemple, des moyens à disposition du chercheur : matériel, temps, ... Parmi les techniques fréquemment employées, on trouve l'ensemencement d'une souche en boîte de Petri, tube à essai, ou galerie: Il s'agit de placer des bactéries à la surface ou à l'intérieur d'une gélose. Les géloses contiennent des éléments nécessaires à la croissance bactérienne, des produits inhibiteurs qui les rendent sélectifs et des indicateurs (pH et colorants) qui les rendent différentiels. On place les cultures microbiennes à une température favorable (en général 35 °C) pendant environ une journée (24 heures) dans une atmosphère, soit aérobie, anaérobie ou microaérophilie (O2). Les bactéries ainsi obtenues serviront à une série de tests permettant de déterminer, selon le(s) but(s) de l'étude : le dénombrement des micro-organismes (dans le cas d'un contrôle sanitaire par exemple) ; l'identification de la bactérie dans le cas d'une souche pure, ou des bactéries présentes (par exemple pour trouver l'agent responsable d'une infection) ; la réalisation d'un antibiogramme, afin de déterminer la sensibilité des bactéries, et de trouver un traitement adapté à une infection. Au laboratoire, le risque est omniprésent. L'hygiène et la stérilisation sont indispensables, afin d'éviter toute contamination du laborantin et/ou de son environnement. Il est évident qu'une culture bactérienne ne doit en aucun cas être jetée sans avoir subi auparavant une décontamination.

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