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Extended depth-of-focus by digital holographic microscopy

Résumé

A recurrent problem in microscopy is the finite depth-of-focus linked to the NA of microscope objectives. Digital holographic microscopy (DHM) has the unique feature of being able to numerically change the focus from a single hologram without the need of moving the sample. Extended depth of focus of amplitude images has been demonstrated, but it has marginal interest for the metrological application of DHM that needs the topography. In this Letter, we demonstrate that DHM is able to provide not only extended depth-of-focus amplitude images but extended focused complex data from which the topography is computed. For this purpose, reflection and transmission measurements on micro-optics (microlens and retroreflector) performed by using standard reconstruction or the extended focused complex data are compared. These experiments demonstrate that DHM measures, from a single hologram acquisition, the accurate sample topography on a numerically increased depth-of-focus.

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Proximité ontologique
Concepts associés (27)
Focus stacking
Le focus stacking (anglicisme), parfois traduit par « empilement de mises au point », est un procédé consistant à combiner plusieurs images dont le plan focal varie, pour donner une image dotée d'une plus grande profondeur de champ qu'avec une image unique. On obtient ainsi des images qui seraient physiquement impossibles à réaliser avec des moyens photographiques classiques. Il est particulièrement bien adapté à la photographie numérique, et aux situations où une image unique a une très courte profondeur de champ, comme en macrophotographie et photomicrographie.
Profondeur de champ
vignette|Un diaphragme ouvert permet d'obtenir une courte profondeur de champ qui isole le sujet de son environnement. vignette|220x220px|Influence de l'ouverture sur la netteté. La profondeur de champ est un facteur déterminant la manière dont une prise de vue peut gérer la netteté relative des différents plans du sujet photographié ou observé. Elle est conçue comme une zone que l'opérateur peut augmenter ou réduire, le reste du sujet, en avant ou arrière de cette zone, perdant ou gagnant inversement en netteté.
Microscope optique
Le microscope optique ou microscope photonique est un instrument d'optique muni d'un objectif et d'un oculaire qui permet de grossir l'image d'un objet de petites dimensions (ce qui caractérise sa puissance optique) et de séparer les détails de cette image (et son pouvoir de résolution) afin qu'il soit observable par l'œil humain. Il est utilisé en biologie, pour observer les cellules, les tissus, en pétrographie pour reconnaître les roches, en métallurgie et en métallographie pour examiner la structure d'un métal ou d'un alliage.
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