Gwendolyne « Gwen » Stacy est un personnage de fiction évoluant dans l’univers Marvel de la maison d'édition Marvel Comics. Créé par le scénariste Stan Lee et le dessinateur Steve Ditko, le personnage apparaît pour la première fois dans le comic-book The Amazing Spider-Man #31 en décembre 1965.
Alors étudiante, Gwen Stacy est la petite-amie de Peter Parker, alias Spider-Man. Le personnage est notoirement connu en raison de sa mort provoquée par le Bouffon vert (The Amazing Spider-Man #121, épisode « La Mort de Gwen Stacy »), tournant émotionnel majeur pour Spider-Man et l'un des symboles de la fin de l'âge d'argent des comics.
Les auteurs et les fans de Spider-Man débattent de la question de savoir si « le vrai amour » de Peter Parker est Gwen Stacy ou Mary Jane Watson (qui devint la petite-amie et l'épouse de Peter par la suite). Des histoires publiées longtemps après sa mort indiquent que Gwen occupe toujours une place spéciale dans son cœur.
Le personnage réapparait parfois dans certaines histoires en tant que clone ou double issu d'un univers parallèle, telle la super-héroïne Spider-Gwen apparue initialement dans la série uchronique What If ?.
Gwen Stacy est étudiante à l' (ESU), une université new-yorkaise fictive de l'univers Marvel. Très amie avec Harry Osborn, elle fait la connaissance de Flash Thompson qui veut lui présenter Peter Parker. Gwen est attirée par le jeune homme, mais celui-ci l'ignore car il est à cette époque très inquiet au sujet de sa tante, tante May. Finalement, elle devient amie avec Parker et ils s'aperçoivent bientôt qu'ils partagent la même passion pour les sciences, ce qui commence à les rapprocher. Lorsque Mary Jane Watson fait son entrée, Gwen devient jalouse et réalise qu'elle aime Peter.
Les deux amis entament une relation amoureuse qui est entachée par les absences répétées de Peter, du fait de ses activités de super-héros en tant que Spider-Man. Mais George Stacy, le père de Gwen, qui a découvert la double identité de Parker, demande à sa fille de rester avec lui.