Êtes-vous un étudiant de l'EPFL à la recherche d'un projet de semestre?
Travaillez avec nous sur des projets en science des données et en visualisation, et déployez votre projet sous forme d'application sur GraphSearch.
Concept
Purification des protéines
Résumé
La purification des protéines est une série de processus divers destinés à isoler une ou plusieurs protéines à partir d'un mélange complexe (cellules, autres particules ou matrices). C'est une étape importante en recherche fondamentale pour la caractérisation de la fonction (études des propriétés), de la structure, sa composition en acide aminé et des interactions d'une protéine d'intérêt, mais aussi en recherche appliquée et industrie pour préparer des matières et réactifs.
Les différentes étapes de la purification consistent en des processus successifs de simplification du mélange complexe initial, retrait des déchets cellulaires (membranes, organites), élimination du matériel génétique, élimination ou conservation de certaines protéines en fonction de leurs caractéristiques chimiques (taille, charge électrique, affinité), isolation par affinité spécifique de la protéine d'intérêt. Toutefois il est difficile voir impossible d'obtenir une protéine totalement pure (l'obtention de protéines est suffisante).
Souvent en fin de purification on réalise une mesure de la pureté de la protéine d'intérêt.
On trouve généralement des protéines dans les tissus biologiques ou les cultures cellulaires (eucaryote ou procaryote).
Pour extraire les protéines, plusieurs étapes sont donc nécessaires.
L'étape de lyse consiste à rompre les parois cellulaires et membranes biologiques.
Plusieurs méthodes de lyse cellulaire peuvent être utilisées :
Lyse mécanique : broyage, sonication (vibrations qui détruisent les parois cellulaires), french press (pression), détergents ou autres adjuvants d'extraction (des inhibiteurs de protéases, des antibiotiques, des chélatants... afin de protéger les protéines d'intérêt).
Lyse enzymatique : choc osmotique, cycles de congélation/décongélation, lyzozyme
L'étape de centrifugation permet une première séparation grossière des débris cellulaires en suspension (parois, mitochondries...)
Une étape de solubilisation consiste à rendre les protéines solubles, généralement en phase aqueuse.
Source officielle
À propos de ce résultat
Cette page est générée automatiquement et peut contenir des informations qui ne sont pas correctes, complètes, à jour ou pertinentes par rapport à votre recherche. Il en va de même pour toutes les autres pages de ce site. Veillez à vérifier les informations auprès des sources officielles de l'EPFL.
Publications associées (11)
Solid-phase peptide synthesis on disulfide-linker resin followed by reductive release affords pure thiol-functionalized peptides
Christian Heinis, Alexander Lund Nielsen, Zsolt Bognár, Ganesh Kumar Mothukuri, Manuel Leonardo Merz, Peter Matei Frisius Pânzar
Thiol groups are suitable handles for site-selectively modifying, immobilizing or cyclizing individual peptides or entire peptide libraries. A limiting step in producing the thiol-functionalized pepti
ROYAL SOC CHEMISTRY2022Broad-spectrum Antiviral Nanoparticles
Viral infections affect millions of people every year, yet broad-spectrum virucidal therapies are not available. Antiviral substances in current use act on specific viral mechanisms against only a sma
EPFL2017New analytical tools combining gel electrophoresis and mass spectrometry
Proteomics has been one of the main projects challenging biological and analytical chemists for many years. The separation, identification and quantification of all the proteins expressed within biolo
EPFL2014Personnes associées (2)
Concepts associés (22)
Purification des protéines
La purification des protéines est une série de processus divers destinés à isoler une ou plusieurs protéines à partir d'un mélange complexe (cellules, autres particules ou matrices). C'est une étape importante en recherche fondamentale pour la caractérisation de la fonction (études des propriétés), de la structure, sa composition en acide aminé et des interactions d'une protéine d'intérêt, mais aussi en recherche appliquée et industrie pour préparer des matières et réactifs.
Étiquette poly-histidine
Une étiquette poly-histidine est un motif d'acides aminés dans une protéine constitué d'au moins six résidus histidine, souvent insérés à l’extrémité N- ou C- terminale de la protéine. On la désigne parfois par les noms hexa-histidine tag (en anglais), 6xHis-tag ou encore la marque déposée His-tag de EMD Biosciences. Elle est fréquemment utilisée pour la purification par chromatographie d'affinité de protéines synthétisées par génie génétique.
Protéine de fusion
Une protéine de fusion est une protéine artificielle obtenue par la combinaison de différentes protéines, ou partie de protéines. Elle est obtenue à la suite de la création par recombinaison de l'ADN d'un gène comportant les cadres de lecture ouverts correspondant aux protéines ou parties de protéines désirées. Les protéines de fusion peuvent également être appelées protéines chimères. Une des applications les plus connues des protéines de fusion est la fusion d'une protéine d'intérêt à une protéine fluorescente.
Cours associés (25)
BIO-203: Integrated labo in Life sciences I
Les étudiants appliquent des techniques de base en biologie moléculaire pour cloner un cDNA d'intérêt dans un plasmide d'expression afin de produire la protéine correspondante dans des cellules de mam
CH-319: Experimental biochemistry and biophysics
A semester long experiment where you plan and construct a fluorescent sensor protein starting from DNA bricks. The protein will be expressed in and purified from bacteria, and characterized by biochem
BIO-212: Biological chemistry I
Biochemistry is a key discipline for the Life Sciences. Biological Chemistry I and II are two tightly interconnected courses that aim to describe and understand in molecular terms the processes that m
Séances de cours associées (162)
Expression et purification des protéines
Explore l'expression des protéines, la purification et la filtration sur gel pour isoler les complexes protéiques.
Techniques d'étiquetage des protéines
Couvre les techniques d'étiquetage des protéines en utilisant des pièces d'auto-étiquetage comme FIASH et SNAP.
Chromatographie des protéines: Techniques de purification
Explore les méthodes de chromatographie des protéines, y compris la purification par affinité et l'élimination des étiquettes, pour des processus de purification des protéines efficaces.