Chromatographie: Purification des protéines

Cette séance de cours couvre les principes de la chromatographie pour la purification des protéines, en mettant l'accent sur les colonnes et la résolution de la chromatographie. Il explique les causes de l'élargissement du pic, telles que la diffusion de eddy, le transfert de masse en phase mobile et le transfert de masse en phase mobile stagnante. La séance de cours traite également des composantes physiques de l'élargissement de la bande et de la courbe de van Deemter. Différents composants de chromatographie, y compris l'indice de réfraction, la viscosité, la diffusion de la lumière et l'absorbance, sont analysés à l'aide d'un réseau de détecteurs tétra. On présente les phases stationnaires et les milieux de filtration sur gel couramment utilisés, ainsi que les principes de chromatographie par échange d'ions et de chromatographie par affinité métallique immobilisée.

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Life has emerged on our planet from physical principles such as molecular self-organization, thermodynamics, stochastics and iterative refinement. This course will introduce the physical methods to st

Chromatographie

La chromatographie est une méthode physico-chimique qui sert à séparer les différentes substances présentes dans un mélange (échantillon en phase homogène liquide ou gazeuse). vignette|458x458px|Chromatographie sur couche mince faisant apparaître les composants d'une plante verte, comme la chlorophylle. Il est probable que la séparation de pigments inspira le nom de la méthode. L'appareil utilisé pour effectuer certaines chromatographies se nomme chromatographe. L'image ou le diagramme obtenu par chromatographie est appelé chromatogramme.

Chromatographie en phase liquide à haute performance

vignette|Un chromatographe en phase liquide à haute performance. De gauche à droite : un dispositif de pompage destiné à générer un gradient de deux solvants une colonne de chromatographie et un détecteur pour mesurer l'absorbance. vignette|Un chromatographe en phase liquide à haute performance moderne. La chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) est une technique de séparation analytique et/ou préparatrice de molécules présentes dans un mélange.

Chromatographie sur colonne

thumb|Chromatographie sur colonne dans un laboratoire de la Food and Drug Administration dans les années 1950. La chromatographie sur colonne est fondée sur le même principe que la chromatographie sur couche mince, sauf que la silice ne se trouve pas sur une plaque mais dans une colonne. Cette technique est très utilisée dans la purification en chimie organique. La séparation des composés est provoquée par l'écoulement continu d'un éluant passant dans la colonne par gravité ou sous l'effet d'une faible pression.

Raie spectrale

Une raie spectrale est une ligne sombre ou lumineuse dans un spectre électromagnétique autrement uniforme et continu. Les raies spectrales sont le résultat de l'interaction entre un système quantique (généralement des atomes, mais parfois aussi des molécules ou des noyaux atomiques) et le rayonnement électromagnétique. vignette|upright=2|Raies de Fraunhofer sur un spectre continu avec leur notation alphabétique et les longueurs d'onde correspondantes.

Spectrométrie photoélectronique X

vignette|upright=1.4|Machine XPS avec un analyseur de masse (A), des lentilles électromagnétiques (B), une chambre d'ultra-vide (C), une source de rayon X (D) et une pompe à vide (E) La spectrométrie photoélectronique X, ou spectrométrie de photoélectrons induits par rayons X (en anglais, X-Ray photoelectron spectrometry : XPS) est une méthode de spectrométrie photoélectronique qui implique la mesure des spectres de photoélectrons induits par des photons de rayon X.

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